Sainte Anne, vêtue de jaune et coiffée d'un large turban associé à une guimpe, est accompagnée de ses trois filles et de ses petits enfants. Selon la Légende dorée de Jacques de Voragine, Anne mariée à trois reprises donna naissance à trois enfants toutes trois prénommées Marie. A gauche se dresse la Vierge Marie vêtue de bleu et tenant dans ses bras l'Enfant Jésus ; à droite drapée dans un manteau rouge se tient Marie, fille de Cléophas et à ses cotés Marie, fille de Salomé. Leurs propres enfants, six garçonnets tous futurs apôtres, les entourent : Jacques le Mineur, Joseph le Juste, Simon, Jude, Jacques le Majeur et Jean l'Evangéliste. Si Jean Fouquet emprunte la composition de son image au Maître de Jouvenel dans des Heures à l'usage d'Angers datées des années 1450 (Paris, BnF, ms NAL 3211, p. 27), il la renouvelle en la plaçant dans un large paysage construit sur le principe de la perspective oblique. Deux hommes sauvages allongés au sol, en contrebas de l'image, tiennent des blasons portant le nom et le monogramme du commanditaire : Etienne Chevalier, l'un des principaux officiers de l'administration royale sous les règnes de Charles VII et de Louis XI.